期刊简介
中华医学会主办。本刊辟有述评、专家论坛、论著、短篇论著、新技术与新方法、临床经验、中医中药、皮肤外科、病例报告、皮肤科教程、药物与临床等原创性论文栏目，是了解中国在皮肤性病学预防和治疗、临床和实验研究工作最新进展的窗口。内容丰富，报道及时，具有指导性和实用性。
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首页>中华皮肤科杂志
- 杂志名称：中华皮肤科杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：0412-4030
- 国内刊号：32-1138/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：2002年获第三届中国科协优秀科技期刊二等奖期刊收录：上海图书馆馆藏, 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 农业与生物科学研究中心文摘, 国家图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), CA 化学文摘(美), 维普收录(中), 万方收录(中)
M13-IN5重组噬菌体的构建与鉴定及其对沙眼衣原体的作用研究
练婷婷；魏世娟；刘原君；任杰；王生；郭媛丽；郭睿；刘全忠；邵丽丽
关键词：沙眼衣原体, 细菌噬菌体M13, DNA, 重组, 包涵体, IN5环
摘要：目的 构建针对沙眼衣原体的活性噬菌体,并评估其对沙眼衣原体的作用.方法 将衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白VP1的IN5序列与M13噬菌体重组,获得重组M13-IN5噬菌体.利用PCR扩增、酶切、测序重组噬菌体基因,验证目的片段是否成功插入;通过噬菌斑形成实验检测重组噬菌体的活性.利用CCK8法检测效价为1011噬斑形成单位(PFU)/ml的M13噬菌体和M13-IN5重组噬菌体对Hela细胞增殖的影响,同时设置空白对照组(未感染衣原体的Hela细胞).Western印迹检测重组噬菌体、M13噬菌体、对数期大肠杆菌ER2738中IN5环蛋白的表达.在沙眼衣原体E型标准株的培养过程中,分别加入效价为1011PFU/ml的M13噬菌体、M13-IN5重组噬菌体进行干预,并设置衣原体对照组.感染后36 h,共聚焦显微镜下观察M13噬菌体和M13-IN5重组噬菌体定位情况;在感染后36、48、60、72 h碘染色观察计数包涵体.两样本均数间比较用t检验;多组样本均数间比较采用方差分析,两两比较采用Bonferroni检验.结果 成功构建含有IN5环基因的具有生物活性的重组M13噬菌体,Western印迹证实重组噬菌体表达IN5环/pⅢ融合蛋白,重组噬菌体效价达3.05×1011 PFU/ml.CCK8法检测显示,空白对照组、M13噬菌体组、M13-IN5噬菌体组A450值分别为3.63±0.01、3.55±0.02、3.70±0.01,组间差异无统计学意义(F=12.0,P＞0.05).共聚焦显微镜定位显示,噬菌体荧光与衣原体包涵体荧光存在重叠;衣原体感染后36、72h,M13-IN5噬菌体组和M13噬菌体组包涵体数目较对照组减少(均P＜ 0.05),且M13-IN5噬菌体组包涵体数目较M13噬菌体组有明显降低(P＜0.05);衣原体感染后48、60h,M13噬菌体组、M13-IN5噬菌体组与对照组包涵体数目差异无统计学意义(P＞0.05).结论 构建的M13-IN5重组噬菌体具有生物学活性,且能够成功表达IN5环蛋白;体外实验中,该噬菌体能进入衣原体包涵体内,且能明显抑制沙眼衣原体感染.
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