MiR-146a 在长波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞光老化中作用机制的研究

摘要：目的：探讨长波紫外线（UVA）诱导人皮肤成纤维细胞（HSF）光老化中 miR-146a 的表达情况，以及上调 miR-146a 表达对其靶基因 Smad4及细胞光老化的影响。方法以10 J/cm2 UVA 照射 HSF （UVA 照射组），分别在0、3、7、14 d 提取 RNA，实时定量 PCR 检测 miR-146a 的表达量。通过慢病毒转染上调 miR-146a 的表达（miR-146a 过表达组），在7 d、14 d 后用荧光显微镜观察转染效率，并通过实时定量 PCR 验证细胞内miR-146a 表达量。空白对照组为正常培养的 HSF（不做任何处理），miR-146a 过表达组为慢病毒转染 HSF 后，再用 UVA 照射。MTT 法检测空白对照组、UVA 照射组、miR-146a 过表达组、miR-146a 过表达组细胞增殖吸光度（A 值），实时定量 PCR 检测各组细胞内老化相关基因 p53、p16和 p21 mRNA 的表达，Western 印迹法检测各组细胞内 Smad4蛋白表达。采用重复测量的方差分析、析因设计的方差分析进行统计学分析。结果重复测量的方差分析显示，随培养时间的延长，UVA 照射组和空白对照组 miR-146a 的表达量均逐渐下降（F =213.840， P <0.01）；UVA 照射组表达量低于空白对照组（F =52.55，P <0.01），且照射时间越长，下调越明显。慢病毒转染HSF 后，细胞内均有较高的荧光表达，miR-146a 过表达组在第7天（10.31±0.17）与第14天时（9.65±0.19）的miR-146a 表达量差异无统计学意义（P >0.05），但较空白对照组（分别为8.33±0.13和7.86±0.11）显著增高，组间差异有统计学意义（F =42.49，P <0.01）。析因设计的方差分析显示，UVA 照射对细胞增殖活性有抑制作用（P <0.01），UVA 照射组、UVA + miR-146a 组细胞增殖均分别低于空白对照组、miR-146a 过表达组（P <0.01）；慢病毒转染上调 miR-146a 的表达对细胞增殖活性也有影响（P <0.01），但 miR-146a 过表达组与空白对照组差异无统计学意义（P >0.05），UVA + miR-146a 组显著高于 UVA 照射组（P <0.01）。实时定量 PCR 和 Western 印迹法结果显示，UVA 照射可上调 p21、p53、p16 mRNA 的表达（均 P <0.01），同时对细胞内 Smad4蛋白表达有促进作用（P <0.01）；UVA 照射组、UVA + miR-146a 组 p21、p53、p16 mRNA 和 Smad4蛋白表达均分别高于空白对照组、miR-146a 过表达组（均 P <0.01），而 miR-146a 过表达组与空白对照组相比差异均无统计学意义（均 P >0.05）， UVA + miR-146a 组均显著低于 UVA 照射组（均 P <0.01）。结论在 UVA 诱导光老化的 HSF 中，miR-146a 的表达受到抑制，上调其表达能够抑制 Smad4的表达，促进光老化细胞增殖，起到抗细胞光老化的作用。